En base a las necesidades de los usuarios de transporte público, definieron el itinerario del metrobús durante la reunión interinstitucional entre representantes de la Secretaría Nacional de Cultura (SNC) y el equipo técnico.

El metrobús pasará por los municipios de Asunción, Fernando de la Mora y San Lorenzo, en un tramo de 11 km. Los tramos del recorrido completo del sistema de transporte son cuatro: el tramo 1, se inicia en la Terminal de Asunción, atraviesa el microcentro de Asu y termina en la intersección de la Avda. Silvio Pettirossi y Avda. Eusebio Ayala.

El tramo 2, se extiende desde las avenidas Silvio Pettirossi y Eusebio Ayala, en toda su extensión. El tramo 3, va sobre la Ruta Nacional N.º 2 “Mcal. Estigarribia”, en Fernando de la Mora, hasta su intersección con la calle Hernandarias, en San Lorenzo.